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一、細(xì)胞周期檢測(cè)1.概念細(xì)胞周期是指細(xì)胞從上一次分裂完成開始,到下一次分裂完成時(shí)為止,包括兩個(gè)階段:分裂間期和分裂期。細(xì)胞周期檢測(cè)的是單個(gè)細(xì)胞的增殖速度,通過縮時(shí)攝影來測(cè)定。2.原理細(xì)胞在不同的時(shí)期,細(xì)胞所含的DNA量不同。正常細(xì)胞的二倍體含量通常為2N,則在G/G1期,細(xì)胞的DNA量為2N,而G2/M期細(xì)胞DNA含量為4N。S期DNA量為2N—4N。碘化丙錠(PI)可以與細(xì)胞內(nèi)的DNA和RNA結(jié)合,通過RNA酶將RNA消化后,檢測(cè)到與DNA結(jié)合的PI熒光強(qiáng)度可以直接反映細(xì)胞...
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封口膜用于多種實(shí)驗(yàn),產(chǎn)品具有熱塑性、延展性,能封培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等常見產(chǎn)品,也出現(xiàn)在植物嫁接處、傷口處理、酒瓶封口等方面。實(shí)驗(yàn)人員喜愛的封口膜,我們來看看哪些吧!產(chǎn)品一:Parafilm封口膜美國(guó)BemisCompany,Inc.出品,Parafilm取自paraffin(石蠟)和film(膜),具有石蠟和聚異丁烯的優(yōu)良性能,特別是在延展性、密封性、疏水性等方面都能滿足實(shí)驗(yàn)人員的需求。產(chǎn)品二:waxfilm封口膜1.膜的延伸性:waxfilm封口膜做到了進(jìn)口封口膜的1.25倍同...
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生物發(fā)光實(shí)驗(yàn)1.確定螢光素酶常見的熒光素酶包括螢火蟲熒光素酶(Fireflyluciferase,F(xiàn)luc)、海洋蛋白質(zhì)熒光素酶(Renillaluciferase,Rluc)和高司氏熒光素酶。它們?cè)谔囟l件下都能催化各自的底物產(chǎn)生相應(yīng)的光,而無需外部激發(fā)器。其中,F(xiàn)luc是應(yīng)用最為廣泛的熒光素酶。推薦使用Goldbio的D-Luciferin做為螢火蟲熒光素酶的底物2.構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)螢光素酶細(xì)胞株穩(wěn)轉(zhuǎn)株即穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,指的是基于某一細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)過表達(dá)或干擾某特定基因的細(xì)胞系...
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一、WB實(shí)驗(yàn)中的磷酸酶抑制劑的作用細(xì)胞或組織裂解時(shí)會(huì)釋放出大量?jī)?nèi)源性蛋白磷酸酶,以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化,從而影響后續(xù)的蛋白檢測(cè)。因此在提取物中適量添加外源性磷酸酶抑制劑,有利于在之后的Westernblotting、免疫共沉淀檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)和蛋白激酶活性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)過程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化,維持蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)。二、WB實(shí)驗(yàn)中的磷酸酶抑制劑的作用原理在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中,靶蛋白會(huì)被可將磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到特定位點(diǎn)的蛋白激酶磷酸化。這些磷酸基團(tuán)在細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)被內(nèi)源性蛋...
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一、WB實(shí)驗(yàn)中的蛋白酶抑制劑作用WB實(shí)驗(yàn)中的蛋白酶抑制劑主要是在蛋白質(zhì)提取過程中,防止蛋白質(zhì)水解,從而保持蛋白質(zhì)的完整性。在蛋白質(zhì)純化、提取過程中常受到其本身存在的水解酶的影響。在提取蛋白質(zhì)的過程中細(xì)胞破碎釋放出蛋白酶,這些酶在與欲提取的蛋白質(zhì)接觸時(shí),一旦條件適宜,就會(huì)發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致蛋白質(zhì)分解。二、WB實(shí)驗(yàn)中的蛋白酶抑制劑的作用原理蛋白酶抑制劑(proteaseinhibitor)從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合,使蛋白酶活力下降,甚至消失,但不使酶蛋白變性的物...
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