技術(shù)文章
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一、甲基化概述甲基化是蛋白質(zhì)和核酸的一種重要的修飾,調(diào)節(jié)基因的表達(dá)和關(guān)閉,與癌癥、衰老、老年癡呆等許多疾病密切相關(guān),是表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容之一。最常見的甲基化修飾有DNA甲基化和組蛋白甲基化。DNA甲基化能關(guān)閉某些基因的活性,去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。二、甲基化檢測方法基本原理在于:樣本經(jīng)亞硫酸鹽處理后,甲基化的胞嘧啶(C)保持不變,但非甲基化的胞嘧啶被...
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在上篇MLPA試驗(yàn)原理中,我們已經(jīng)詳細(xì)介紹了MLPA技術(shù)。MLPA,即多重連接探針擴(kuò)增技術(shù),是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測基因的拷貝數(shù)變異和序列變異。它結(jié)合了PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))和連接酶技術(shù),通過設(shè)計(jì)特定的探針來識別和擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列。下面讓我們一起來看看MLPA的試驗(yàn)步驟吧!MLPA試驗(yàn)步驟分為六步:變性、雜交、連接、PCR擴(kuò)增、片段分離、數(shù)據(jù)分析。一、變性將DNA標(biāo)本放入PCR儀中加熱5分鐘,使DNA雙鏈解鏈成單鏈。純化的樣本DNA被變性。二、雜交加入雜交反應(yīng)液。雜...
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MLPA技術(shù),即多重連接探針擴(kuò)增技術(shù),于2002年首先報(bào)道,是近幾年發(fā)展起來的一種針對待檢DNA序列進(jìn)行定性和半定量分析的新技術(shù)。該技術(shù)高效、特異,在一次反應(yīng)中可以檢測45個(gè)核苷酸序列拷貝數(shù)的改變,已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域、多種疾病的研究。下面讓我們一起來看看MLPA技術(shù)的試驗(yàn)原理吧!在MLPA實(shí)驗(yàn)中,純化的樣本DNA被變性。之后用MLPA探針寡核苷酸孵育過夜。每個(gè)MLPA探針都具有針對特定基因組序列的探針。每對MLPA探針包括兩條單鏈DNA:左側(cè)探針和右側(cè)探針寡核苷酸。簡稱分別是...
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蛋白Marker被稱為蛋白質(zhì)質(zhì)量標(biāo)定劑,是一種由已知分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)混合物構(gòu)成的,類似于"尺寸"的工具,用于指示蛋白質(zhì)條帶的大小。下面讓我們一起來看看非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker的區(qū)別吧!非預(yù)染蛋白Marker:是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液,方便不同大小的蛋白比較。非預(yù)染的Marker使用上不如預(yù)染Marker好用,因?yàn)殡娪具^程中看不到,電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實(shí)驗(yàn)過程中起預(yù)示參照作用,屬于“后知后覺”型的。但是由于蛋白沒有附帶...
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常見緩沖液有什么實(shí)驗(yàn)室中常常使用的各類溶液種類繁多,且配制方法五花八門,是否挑花眼了呢?本文總結(jié)了近三十種常用溶液、緩沖液、培養(yǎng)基的配制方法,涵蓋了分子生物學(xué)、蛋白分析、細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)等各個(gè)領(lǐng)域。下面讓我們一起來看看常見緩沖液有什么吧!一、蛋白電泳緩沖液蛋白電泳緩沖液種類非常之多,需要根據(jù)凝膠體系來進(jìn)行選擇。凝膠系統(tǒng)為Tris-甘氨酸體系時(shí),可選擇Tris-甘氨酸電泳緩沖液,凝膠系統(tǒng)為Bis-Tris體系時(shí),可選擇MES或MOPS緩沖液,當(dāng)凝膠系統(tǒng)為Tris-trici...
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